Mots clés : cytométrie en flux, tri cellulaire, fluorochromes

La cytométrie en flux permet de mesurer la fluorescence ou la lumière diffractée d'un grand nombre de particules à haute vitesse telles que des cellules, billes, bactéries, levures ou organites.

À l'Institut Curie, la cytométrie en flux est principalement utilisée pour quantifier de multiples marqueurs sur des cellules avec la possibilité de trier simultanément plusieurs sous-populations d'intérêt.

Le principal avantage de la cytométrie en flux est la vitesse d'acquisition des données pour un très grand nombre de cellules, permettant l'analyse de sous-populations cellulaires complexes et/ou rares et de les trier pour ensuite les mettre en culture ou encore les analyser avec des outils de biologie moléculaire.

Les cellules en suspension peuvent être marquées simultanément avec 11 fluorochromes, chacun identifiant une molécule d'intérêt. Les cellules marquées passent alors devant un laser et l'intensité fluorescente émise pour chaque fluorochrome est quantifiée pour chacune des cellules.
L'utilisation de sondes fluorescentes permet de détecter divers paramètres comme le potentiel de membrane, le pH ou le cycle cellulaire (prolifération, apoptose, etc).

Les fonctions de la plate-forme de cytométrie en flux sont le tri cellulaire, ainsi que la formation des personnes à l'utilisation autonome des cytomètres multi-paramétriques à haute vitesse et des logiciels s'y référant pour l'acquisition et l'analyse des données.

Fonctions

•  tri cellulaire
• formation des utilisateurs sur les appareils et logiciels
• aide à l'acquisition et l'analyse des données
• conseils sur la préparation cellulaire
• interprétation des résultats
• aide à la préparation des manuscrits, c'est-à-dire des figures, documents et méthodes.

Les installations principales de cytométrie en flux de l'Institut Curie, partagées entre l'Hôpital et le Centre de recherche, se trouvent au Laboratoire Laetitia, 26 rue d'Ulm, Paris.

Equipements

• 2 analyseurs : un FACSort (4 couleurs) et un LSRII (11 couleurs)
• 2 trieurs : un FACSVantage (8 couleurs avec UV) et un FACSAria (10 couleurs).

Contact et autorisation pour l'utilisation des équipements

• Analyse

Les analyseurs sont en libre-service. Plusieurs autres cytomètres en libre-service sont disponibles en d'autres points de l'Institut Curie, à Paris et à Orsay.

L'utilisation des cytomètres en libre-service pour la plateforme au Laboratoire Laetitia se fait :

• Sur inscription au laboratoire,
• Sur RV téléphonique +33 1 56 24 58 01 (bureau) ou le +33 1 56 24 58 02 (laboratoire)

Une formation est nécessaire pour utiliser les appareils en libre-service de façon autonome. Les formations théoriques ont lieu 2 fois par an, les formations pratiques 1 fois par mois. Tout nouvel utilisateur doit contacter les responsables de la plate-forme pour leur premier passage autonome, ou si l'aide d'un ingénieur est souhaitée.

Tri

Sur rendez-vous auprès des responsables :

Zofia.Maciorowski@curie.net , Coralie.Guerin@curie.net ou Annick.Viguier@curie.net
+33 1 56 24 58 01 (bureau) ou +33 1 56 24 58 02 (laboratoire).

Disponible dans l'unité d'Immunologie Clinique (4ème étage : 26 rue d'Ulm) :

• Un trieur par billes magnétiques Automacs en libre-service
• Un analyseur Luminex qui permet la quantification de multiples analyses en phase homogène dans de très petits volumes avec un système Elisa sur billes fluorescentes.

Responsable Emmanuel.Martin@curie.net : +33 1 44 32 42 29

Pour plus d'informations
cytometrie.curie.fr