Présentation
Activité
Les protéines sont des éléments essentiels à la vie de la cellule. Les protéines recombinantes sont produites au laboratoire par une bactérie ou par des cellules eucaryotes (Levure, cellules d’insectes ou mammifères), dont le matériel génétique a été modifié. Elles peuvent être ensuite purifiées et utilisées en recherche pour comprendre les mécanismes complexes des fonctions cellulaires ou en thérapies.
La plateforme technologique de production de protéines recombinants a été créée en 1997. Elle a pour mission d’accompagner les différentes équipes de recherche de l’Institut Curie dans le développement de projets de production de protéines recombinantes et d’anticorps. Elle est également ouverte aux collaborations avec différents laboratoires académiques.
La plateforme a développé plusieurs systèmes d’expression de protéines recombinantes en utilisant différents types de cellules : Bactérie E.coli, levures, cellules de mammifères et cellules d’insectes/baculovirus. Toute protéine peut présenter des difficultés particulières en terme de quantité obtenue, de stabilité ou de solubilité, qui peuvent être des éléments essentiels à l’activité de cette protéine. Le savoir faire acquis depuis plusieurs années a permis de mener à bien plus d’une centaine de projets de production de différentes protéines (protéines sécrétées, nucléaires, membranaires.)
Aussi l’optimisation des séquences de gènes à produire est une étape essentielle dans la réussite du projet. Pour cela nous avons développé plusieurs combinaisons de vecteurs d’expression. Ces outils de génétiques associés à l’optimisation des conditions de culture cellulaire nous ont permis de faire aboutir plusieurs projets de production.
L’ensemble des systèmes d’expression optimisés (vecteurs, cellules) sont mis à disposition des équipes de recherche et des laboratoires académiques.
Les personnes utilisant nos outils pour leurs expériences s’engagent à citer la plateforme de l’Institut Curie dans les remerciements de leur publication.
Objectifs
La plateforme a pour objectif le développement la mise à disposition des outils (souches, lignées cellulaire, vecteurs d’expression et des protocoles optimisés) nécessaires à l’expression de protéines recombinantes dans différentes système d’expression et la purification des protéines d’intérêt.
Module Protéine Recombinantes
Les systèmes d’expression (vecteur et souche) disponibles à la plateforme :
Prokaryotic expression systems
Escherichia coli (diverses souches)
Bacillus megaterium
Yeast
Pichia pastoris (diverses souches)
Kluyveromyces lactis
Insect cells/Baculovirus
– Sf9, Sf21, Hi5
– Cellules S2 de drosophile
Protozoan
Leishmania tarentolae expression system
Mammalian cells :
– CHO-S, HEK293, NSO, HKB-11
Lignées de ciblage d’expression stable par FRT (CHO et HEK)
La production dans d’autres systèmes d’expression est possible dans certains cas particuliers.
Module : Production et purification d’Anticorps
Anticorps polyclonaux
Anticorps monoclonaux
On assure la formation et la fourniture des protocoles et le mini réacteur cell-line pour la production et purification des anticorps monoclonaux spécifique et polycloanux.
Module Purification de protéines
2 système de purification Akta-pure (des grands volume) dont en libre service
On assure la formation de personnel ayant un grand programme de purification
Mise à la disposition les systèmes de purification et les colonnes
Entretien des appareils
Assure la purification pour des projet spécifiques (courte duré : interaction protéine-protéine par exemple)
Autres services :
Gestion de ressources technologiques
- Développement de catalogue de protéines et d’enzymes recombinants
- Préparation est distributions des vecteurs d’expression de protéines recombinantes
- Développement de nouveaux vecteurs d’expression avec veille technologique
- Maintien des stocks de baculovirus recombinant
- Développement des procédés de purification de protéines
Réseaux et collaborations
La plateforme fait partie du réseau européen P4EU: (Protein Production and Purification Partnership in Europe).
Collaboration étroite avec les plateformes de production de protéines recombinantes de l’Institut Pasteur.
L’accès aux services de la plateforme :
Les services de la plateforme sont accessibles à toutes les équipes de l’Institut Curie.
La plateforme est ouverte aux laboratoires extérieurs à l’Institut Curie, une tarification différentielle est appliquée
Equipements
Fermenter for cell culture and protein production
Chromatography system: for protein purification
Cell Disruption: proteins extraction
Insect cell culture for protein production
Hybridoma system production
Akta flux for sample concentration
Formation
Le personnel de la plateforme est en charge des expériences liées aux projets menés sur la plateforme. Cependant, la formation sur la technologie de protéines recombinante est possible sur demande.
